Taq DNA聚合酶，通常简称为Taq酶，是目前最常用的DNA聚合酶之一，其来源于Thermus aquaticus这种热古菌，具有在高温下稳定活性的特点。在分子生物学领域，Taq酶在多种实验中发挥着重要作用。现在，我们来了解一下HCY™ Taq DNA聚合酶，它在野生型Taq酶的基础上，经过基因突变与重组改造，具有更高的热稳定性和扩增效率，为DNA扩增实验提供了更加可靠的工具。
Taq DNA Polymerase
基本信息
- 来源和改造：HCY™ Taq DNA聚合酶源自Thermus aquaticus，通过基因突变与重组改造获得。这使得它比野生型Taq DNA聚合酶更具热稳定性和扩增效率。其分子量为106 KD，是一种较大的酶分子。
- 活性特点：HCY™ Taq DNA聚合酶具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，但不具备3’-5’外切酶活性。在PCR反应中，它的延伸速度最快可达5 kb/分钟，这意味着它能够迅速扩增DNA片段。
- 克隆优势：通过使用HCY™ Taq酶进行PCR反应，所得产物的3’端带有A碱基，这使得产物可以直接克隆于TA载体中。此外，也可以在末端平滑化和磷酸化后克隆到平滑末端载体。
- 活性定义：HCY™ Taq DNA聚合酶的活性定义是在74℃、30分钟内，以10 nmol的全核苷酸为模板，摄入产生酸性不溶物的活性。这一定义为1个活性单位(U)。
用途与适用范围
- PCR扩增：HCY™ Taq DNA聚合酶适用于PCR法扩增DNA。它能够扩增长度高达5 kb的DNA片段，特别适用于扩增3 kb以下的DNA片段。
- 克隆应用：由于产物的特性，大部分PCR产物的3’端附带“A”碱基，使其可以直接克隆到T-Vector中。同时，经过平滑化和磷酸化处理，也可以克隆到其他载体中。
性能介绍
片段长度扩增：HCY™ Taq DNA聚合酶在不同长度的DNA片段扩增中表现出色。无论是0.5 kb、1 kb、2 kb还是5 kb大小的目的片段，都能高效率地进行扩增。这说明它在各种片段的扩增实验中都表现出良好的效果。
灵敏度：在扩增大肠杆菌300 bp片段时，添加不同浓度的模板进行扩增，HCY™ Taq DNA聚合酶展现了很高的灵敏度。甚至可以将模板浓度降低至1 ng的水平进行扩增，这表明其在低模板量下也能可靠地进行扩增。
扩增速度：根据延伸时间的变化，HCY Taq DNA Polymerase在不同大小目的片段扩增中的速度表现得非常出色。在延伸时间为30秒和60秒时，分别能够高效扩增2 kb和5 kb的DNA片段。这证明在以λ DNA为模板的PCR反应体系中，其扩增速度可以达到每分钟5 kb。
质量控制
HCY™ Taq DNA聚合酶经过严格的质量控制，纯度大于98%。它经过PCR敏感性、特异性、可重复性的功能检测，不含外源核酸酶活性，也不受外源核酸酶污染。同时，它也不含表达宿主核酸残留。
使用与保存
该产品应长期存放于-20℃闭光保存，如需频繁使用，可分装后存放于4℃，避免反复冻融。解冻后应充分混匀，避免产生大量气泡，以保证其性能。
结论
HCY™ Taq DNA聚合酶作为一种经过基因改造的Recombinant Taq DNA Polymerases，为分子生物学实验中的PCR扩增提供了可靠高效的工具。其在不同长度片段的扩增、灵敏度和速度方面的表现，以及经过严格的质量控制，使其成为研究者们在DNA扩增领域的有力助手。